PCR仪 二

大家好，今天来为大家解答PCR仪这个问题的一些问题点，包括二也一样很多人还不知道，因此呢，今天就来为大家分析分析，现在让我们一起来看看吧！如果解决了您的问题，还望您关注下本站哦，谢谢~

样品槽可放置0.2mLPCR管(12X8),0.5mLPCR管(11X7)及96孔板。将样品放人样品槽后,将热盖上的旋钮按顺时针方向旋至对应的管型处使其紧闭。

出现主菜单后,按standard或new方式编制要运行的PCR程序,在输入预变性的温度及时间、变性的温度及时间、退火的温度及时间、延伸的温度及时间、Sock的温度后,按“start/stop”键开始启动运行当前程序。

如果设计程序时选择了CNTRL/TUBE命令,则程序启动后需要输入反应管的相应型号和样品体积。

1)按“SEL”键选择反应管的型号,按“ENTER”键确认。

2)输入溶液体积,按“ENTER”键确认。

3)当程序运行时,按“Opt”键可以显示大概的运行时间和预期结束的时间。

开机后按照常规PCR反应设置程序,按控制面板上的四个方向选择键将闪烁的光标移至程序退火这一步的数字序号处(一般为3),按住控制面板上的“OPTIONS”键,则进入温度梯度程序设计。

按方向选择键将光标移至G=0.0°(输入数值范围0~12),一旦输入这个数值,即对样品槽的每一列设定了不同的温度,预设的温度在样品槽的中间,沿着样品槽从左至右温度依次升高。用0.2mL的管可设置12个不同的温度,用0.5mL的管则可设置11个不同的度。在Option/Gradient中查看温度分布,反应槽最高温度不能超过99℃。

1)T输入温度、循环次数以及相关选项。

2)±0.0℃温度变异量(±0.0℃):每一个循环温度增加或减少的量。必须注意温度不能超过99℃。例如，变异量是十0.1℃,25个循环,则起始温度不能超过96.5℃。先输入数值，然后输入加减号。十:温度上升;一:温度下降。

3)±0.00时间变异量(±s):输入每个循环时间的增加或减少(最大为1min)

4)R=3.0℃/sRamp(K/S)代表了一个循环曲线的升降温速率。这个值越高,则加热或降温就越快。允许值范围:0.3~3.0K/S。

5)±0.0℃/sRampincrement(士s):输入升降温速率的变异量。该速率不能超过3K/S,因此,如果起始速率为0.3,变异量为0.1,则最大循环次数为27个。

程序设计好后可直接按控制面板上的“start”键运行，如果设计程序时选择了CNTRL/TUBE命令,则程序启动后需要输入反应管的相应型号和样品体积。

1)按“SEL”键选择反应管的型号,按“ENTER”键确认。2)输入溶液体积,按“ENTER”键确认。

3)当程序运行时,按“Opt”键可以显示大概的运行时间和预期结束的时间。4)Lid用来确定热盖的温度。允许值为0~110℃。启动时,NOWAIT无须热盖温度,程序直接启动。WAIT程序直到热盖达到预设的温度才启动。

程序运行结束后,按“Exit”退出原程序,关闭机器后部的开关。注意:

(1)Sock时,温度应设为10℃,时间不要超过30min。温度过高,时间过长,易导致仪器的损坏。

(2)操作时,要严格遵守以上原则,及时记录仪器运行的情况。

英国ThermoHybaid原位PCR仪如图5-3-74所示。

3)5μg/mL蛋白酶K消化组织37℃10min。

1)切片滴加特异性序列引物30μLPCR扩增反应液，覆盖硅化盖玻片,石蜡油封边。

2)PCR热循环:94℃,1min;55℃,1min;72℃,1.5min,共25~30个循环，72℃延伸10min。

3)氯仿洗去盖玻片,4%多聚甲醛后固定10min,梯度酒精脱水,干燥。

1)加地高辛标记探针的杂交液，98℃变性10min,-20℃退火5min,42℃杂交过夜。

2)杂交后用2XSSC洗涤10min,3次,1XSSC洗涤10min,3次。

4)加碱性磷酸酶标记的羊抗地高辛抗体复合物,37℃,2h。

6)NBT、BCIP暗处显色,镜下控制,终止显色。

1)蛋白酶K(0.3mg/mL)54℃消化20min,蒸馏水洗。

2)95℃加热3min,灭活残存的蛋白酶。

1)在有RNA酶抑制剂存在的条件下,用随机六聚物进行逆转录反应。

2)用热启动法进行PCR扩增:标本加热至75℃时加上反应液,覆以盖玻片,四周用指甲油密封，然后将温度升至95℃，2min,再将热循环仪设定为95℃，45s,55℃,1min和75℃,45s,共26次循环。

3)扩增结束后,在80℃烤15~30min。

2)加上杂交液,湿盒内50℃过夜;杂交液组成:25%硫酸葡聚糖,2XSSC,50%甲酰胺，0.33mg/mL变性的鲑鱼精子DNA,每0.5mL杂交液内含生物素标记探针1ng。

3)扩增的β-肌动蛋白和IL-6用DAKO检测试剂盒K600(链霉卵白素,生物素标记的碱性磷酸酶和硝基四氮唑蓝)检测,阳性反应呈紫色。

关于PCR仪和二的介绍到此就结束了，不知道你从中找到你需要的信息了吗 ？如果你还想了解更多这方面的信息，记得收藏关注本站。